詳細內(nèi)容
產(chǎn)品名稱:DNA末端粘轉平試劑盒
產(chǎn)品英文名稱:DNA Blunting Kit
產(chǎn)品分類:分子生物學試劑
純度/規(guī)格:30T
保存:-20℃,有效期1年。
產(chǎn)品簡介:
本產(chǎn)品利用Pfu DNA polymerase所具有3′到5′的聚合酶活性和5′到3′外切酶活性,將3′或5′突出的DNA---pian段轉化成平末端,用于克隆工作。
產(chǎn)品特點:
1.簡單,精心優(yōu)化過的2×Polishing Buffer中含有所需要的所有成分,不需要單獨準備。
2.適用于任何平末端的DNA載體。
使用方法:
1. DNA---pian段的準備:
無論是來源Taq,Tth,T7,Klenow和Vent等DNA聚合酶合成的DNA---pian段,還是用限制性內(nèi)切酶制備的DNA---pian段,粘轉平之均需要將DNA沉淀以便去除反應液中的無關成份。沉淀DNA的方法包括經(jīng)典的鹽/純沉淀法,離心柱DNA 吸附法和百奧萊博的一管式非醇超快DNA沉淀法。
2. 設置粘轉平(Polishing)反應:
在一個干凈的離心管中,分別加入
3′或5′突出的DNA---pian段 10-500ng
2×Polishing Buffer 25μL
Pfu DNA polymerase 1μL
補水到 50μL
72℃保溫2小時。
注意:如果不使用熱蓋式PCR 儀器加熱,則需要在反應管中再加入適量液體石蠟以防反應過程中水份蒸發(fā)。
3.反應后處理
粘轉平反應后,樣品可以放-20℃長期保存,也可以直接用于T4 DNA連接酶催化的連接反應。對10μL的連接反應體系,一般需要加入1-2μL粘轉平反應液。由于Pfu DNA polymerase在連接反應的溫度條件下幾乎沒有活性,所以不必去除。但文獻報道,去除后連接效率更高。

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貨號 產(chǎn)品名稱
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原創(chuàng)作者:上海遠慕生物科技有限公司
標簽:
DNA末端粘轉平試劑盒
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