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　　微生物侵入法，又稱微生物挑戰(zhàn)法，是一種較為常見的密封完整性測試方法，通常與模擬灌裝同時進行。通過按照模擬灌裝驗證方案進行培養(yǎng)基模擬灌裝，然后進行壓塞軋蓋后，目檢合格，經已驗證的滅菌柜滅菌后，將容器密封面浸入到高濃度的菌液中，使樣品容器內的培養(yǎng)基充分接觸封口內表面，樣品的頸部及封口的外表面應完全浸泡在菌懸液中，浸泡一定時間后取出，定期培養(yǎng)后檢查是否有微生物侵入，以確定容器密封系統(tǒng)的完整性。同時，需要做陽性對照試驗，確認培養(yǎng)基的促生長能力。
 

　　一、 微生物侵入法試驗方法

　　將新鮮的銅綠假單胞菌（Pswudomonas aeruginosa）ATCC9027的菌懸液倒入不銹鋼桶中。

　　1、將50個經滅菌的試樣編號，完全侵入菌懸液中，同時將袋平放，使袋內的無菌培養(yǎng)基充分接觸焊接部位的內表面，試樣容器在菌懸液中持續(xù)浸泡4小時。

　　2、浸泡結束時再取一份菌懸液，用平板計數菌懸液的濃度。

　　3、從菌懸液中取出試樣，擦干試樣容器外殘余的菌懸液，然后用含0.5%過乙酸的70%異丙醇消毒容器外表面。

　　4、取裝滿培養(yǎng)基樣品兩個，作陽性對照，其外表用含0.5%過乙酸的70%異丙醇消毒，接種入10～100CFU銅綠假單胞菌，按步驟8.2進行培養(yǎng)基的營養(yǎng)試驗。

　　5、將挑戰(zhàn)試驗用的試樣培養(yǎng)7天，觀察檢查試樣容器內培養(yǎng)基中微生物的生長情況。有生長記作+，無生長記作-。如果試樣容器長菌，按8.2方法確認生長菌是挑戰(zhàn)微生物——銅綠假單胞菌；如果所有試樣容器都不長菌，則取10個試樣按8.2進行培養(yǎng)基的營養(yǎng)性試驗。

　　6、試驗結束后，挑戰(zhàn)試驗用菌懸液經121℃30分鐘滅菌后丟棄。

　　二、微生物侵入法判斷標準

　　1、步驟2、步驟4、5中進行的營養(yǎng)性試驗都合格，試樣的挑戰(zhàn)試驗才有效。

　　2、在挑戰(zhàn)試驗開始時，挑戰(zhàn)用菌懸液濃度（活菌數）必須達到1×106CFU/ml。

　　3、挑戰(zhàn)試驗中如長菌，需記錄長菌的試樣數，并按下述要求作進一步調查。

　　4、仔細檢查容器各部位封口處是否有缺損，造成微生物浸入。

　　5、將觀察到試樣容器封口的缺陷，采用拍照詳細記錄。

　　6、如果任何挑戰(zhàn)試驗中長菌的容器不是由于容器封口明顯的物理性缺損所致，試驗作失敗論處。

　　三、微生物侵入法檢測儀器

　　微生物侵入法密封完整性測試除了需要準備菌液外，還需要借助相關檢測儀器設備來完成。