細胞分選在多種研究域都有涉及，例如腫瘤學，神經生物學，免疫學等。但是大家對它們的優(yōu)缺點可能不太清楚，那天遠慕生物在這里跟大家聊一下流式分選的原理、應用及與磁珠分選的區(qū)別。
流式細胞儀分選原理當經熒光染色或標記的單細胞懸液放入樣品管中，被高壓壓入流動室內。流動室內充滿鞘液，在鞘液的包裹和推動下，細胞被排成單列，以一定速度從流動室噴口噴出。在流動室的噴口上配有一個超高頻的壓電晶體，充電后振動，使噴出的液流斷裂為均勻的液滴，待測細胞就分散在這些液滴之中。將這些液滴充以正、負不同的電荷，當液滴流經過帶有幾千伏的偏轉板時，在高壓電場的作用下偏轉，落入各自的收集容器中，沒有充電的液滴落入中間的廢液容器，從而實現(xiàn)細胞的分離。
1.先制備單細胞懸液（可檢測多種樣本的單細胞懸液：外周血、骨髓、細胞穿刺液、洗脫液、實體組織、培養(yǎng)細胞等，如果是無菌實驗應該注意無菌操作）
2.樣本染色：調節(jié)電壓與選取目的細胞群（分選應該做一個預實驗，優(yōu)化儀器的測定條件，建立分選門）
3.細胞分選與收集
流式分選的應用1.細胞增值、活性和凋亡研究
2.疾病細胞如炎癥細胞、腫瘤細胞等的發(fā)生、發(fā)展和轉歸研究
3.基因表達和表達調控研究
4.細胞內信號傳導和生物大分子間相互作用研究
5.各種病原體如病毒、細菌等基礎和致病性和致病機理研究
6.藥理藥效和藥物開發(fā)研究
7.移植和細胞治療研究
8.生物材料對細胞結構、活性和功能的影響
利用儀器的分選功能分選得到高純度、高活性的稀有細胞，通過直接培養(yǎng)、誘導、增殖、分化、活化和移植等進行更深一步的細胞功能和細胞治療探索，還可以在此基礎上逆向進行基因組合
蛋白質組相關研究，尋找致病基因、致病蛋白和疾病信號傳導方式。
影響流式分選的因素1.分選速度：振蕩頻率（頻率越高，速度越快）、鞘液壓力、噴嘴大小、上樣速度(速度過快，得率會降低，故應該按實驗需求來設定)
2.分選純度：精確設定液滴延遲時間（跑微球去矯正）、保證液流穩(wěn)定、選擇合適的分選模式、排除樣本粘連、合理設門（用散點圖）、合理閾值設定
3.分選得率：液滴延遲時間要準確、液流穩(wěn)定、如果不考慮純度的情況下（不需后續(xù)培養(yǎng)），可以選擇Enrich/yield分選模式
4.分選活性：細胞本身的活性、儀器潔凈程度、鞘液壓力、噴嘴大�。▽τ诖嗳跫毎M量采用低壓和大噴嘴，包裹細胞的液滴越大，對細胞的沖擊越�。�、上樣管路設計及管壁光滑程度
免疫磁珠法分離細胞原理是基于細胞表面抗原能與連接有磁珠的特異性單抗相結合，在外加磁場中，通過
抗體與磁珠相連的細胞被吸附而滯留在磁場中，無該種表面抗原的細胞由于不能與連接著磁珠的特異性單抗結合而沒有磁性，不在磁場中停留，從而使細胞得以分離。
免疫磁珠法分為正選法和負選法：正選法：磁珠結合的細胞就是所要分離獲得的細胞
負選法：磁珠結合不需要的細胞，游離于上清液的細胞為所需細胞
磁分離細胞的重要指標是：1.純度和得率，這取決于磁珠所連接單抗的特異性和磁珠大小（磁性），然而太小的磁珠得率不高，太大的磁珠又會影響細胞活性，也無法直接上流式。
2.磁珠大小約為200nm為中等大小磁珠
3.小磁珠的優(yōu)點是對細胞溫和，不影響分離細胞的后續(xù)培養(yǎng)，可直接上流式檢測，不影響散射光；缺點是需要很強的磁場來分離細胞，分離速度慢，得率不高，需要一次性的分離柱，不能在普通試管進行，成本昂貴。
4.大磁珠的優(yōu)點是技術簡單，分離可在試管中完成，易于增減細胞用量，速度快，得率高，成本低；缺點是對細胞造成機械壓力，影響其生物學活性，不利于分離后培養(yǎng)，純度低，阻塞FCM的噴嘴。
客服一
