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　　一、大鼠神經(jīng)元細(xì)胞（酶消化法）

簡述：新生24h或E18胎鼠，取腦，剝離海馬，剪碎，木瓜酶消化，清洗過篩后鋪于多聚賴氨酸包被的培養(yǎng)板中。

二、大鼠雪旺細(xì)胞（植塊法）

簡述：新生24h大鼠，取坐骨神經(jīng)，剝?nèi)ネ饽ず褪�膜，剪�?mm3的小塊，均勻鋪于培養(yǎng)皿內(nèi)，加少量血清，37℃ CO2培養(yǎng)2h后，再加入培養(yǎng)基，24-48h后有細(xì)胞爬出。

三、大鼠胰島（酶消化加密度梯度離心）

簡述：SD大鼠，常規(guī)麻醉、固定、消毒、進(jìn)腹、膽總管插管，逆行注入預(yù)冷的１mg/ml膠原酶P溶液10ml。迅速取下胰腺，38℃水浴消化10分鐘，600μm不銹鋼網(wǎng)過濾，加入4℃新生牛血清和4℃Hank’s液終止消化。細(xì)胞懸液離心后，4℃ Hank’s液洗滌兩次。沉淀物加25%Ficoll混勻，其上依次分別加入23%、20%、11%Ficoll溶液和Hank’s液，離心后吸出23%-20% 及20%-11%界面的胰島，用4℃Hank’s液洗滌離心共三次。

四、大鼠心臟竇房結(jié)細(xì)胞（酶消化法）

簡述：大鼠心臟竇房結(jié)位于上腔靜脈靠近右心房處的內(nèi)壁上；取出生2-3day的新生大鼠，75%酒精浸泡后，固定于解剖板上，開胸，顯微剪分離出上腔靜脈及右心房一部，至于冷的HANKS緩沖液中，于解剖鏡下觀察搏動(dòng)點(diǎn)，并剪去多余部分；之后將幾只鼠的竇房結(jié)集中，剪碎后用0.5mg/ml II型膠原酶37℃消化20-30分鐘，期間吹打數(shù)次，可分部收集消化下來的細(xì)胞。收集到的細(xì)胞加入10倍體積的PBS，1000rpm離心5分鐘，棄上清，重復(fù)清洗一遍，沉淀中加入15%FBS的高糖DMEM培養(yǎng)基，重懸細(xì)胞，鋪板，37℃，5%CO2 培養(yǎng)90分鐘后，將未貼壁的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)皿中，繼續(xù)培養(yǎng)，每天換液一次。

五、大鼠關(guān)節(jié)滑膜間質(zhì)細(xì)胞（酶消化法）

簡述：大鼠麻醉后，75%酒精消毒術(shù)區(qū)，于雙側(cè)膝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)腔取出滑膜組織，浸泡于含1%鏈霉素和青霉素的雙抗H-DMEM中，低溫下轉(zhuǎn)移至超凈工作臺(tái)。使用含1 %雙抗的PBS沖洗滑膜組織3次，用眼科剪將其剪成約1 mm×1 mm大小的組織塊。加入10倍體積的0.4% Ⅰ型膠原酶，于37 ℃，體積分?jǐn)?shù)5%CO2飽和濕度條件下進(jìn)行4 h消化，待絮狀物大部分消失后，100μm細(xì)胞篩過濾，吸取濾過液，1 200 r/min離心5 min，棄上清液，無菌PBS洗滌3次，用含體積分?jǐn)?shù)10%胎牛血清的H-DMEM高糖培養(yǎng)基(含200 mmol/L谷氨酰胺，100 μmol/L抗壞血酸，100 U/mL青霉素，100 mg/L鏈霉素)，以2×106/孔的細(xì)胞濃度接種于六孔板中，置37 ℃，體積分?jǐn)?shù)5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。