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哺乳動物穩(wěn)定細(xì)胞株篩選常見問題

1、為什么要構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株
答：對于少量、臨時的實驗，瞬時轉(zhuǎn)染是完全符合需求的，但是如果試驗中需要長期大量的使用某種細(xì)胞，我們就需要構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株，構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株的好處在于
1、可以減少不同批次實驗中轉(zhuǎn)染效率差異帶來的實驗結(jié)果差異，提高實驗的可重復(fù)性。
2、構(gòu)建好細(xì)胞系后不必再進行瞬時轉(zhuǎn)染實驗以及反復(fù)制備質(zhì)粒，減少工作量。
3、不再使用價格高昂的轉(zhuǎn)染試劑，節(jié)約實驗成本。

2、所有的細(xì)胞株都可以構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞系嗎？
答：不是所有的細(xì)胞株都能構(gòu)建成為穩(wěn)定細(xì)胞系的。構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞系需要滿足2個條件：
1、細(xì)胞能穩(wěn)定傳代；
2、細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率滿足要求。遠(yuǎn)慕生物主要是為科研及工業(yè)用戶構(gòu)建過表達(dá)細(xì)胞株，采用的主要是CHO細(xì)胞和293細(xì)胞。

3、構(gòu)建好的穩(wěn)定細(xì)胞系如何培養(yǎng)和保存？
答：我們提供的單克隆和多克隆細(xì)胞系培養(yǎng)和保存均與原來的細(xì)胞株無異，無需抗生素維持。

4、單克隆和多克隆細(xì)胞株的區(qū)別是什么？
答：單克隆細(xì)胞是轉(zhuǎn)染目的基因后經(jīng)過克隆篩選得到的，由個細(xì)胞擴增形成的細(xì)胞株，目的基因整合的位置和拷貝數(shù)都是致的，可以長期維持表達(dá)量不變。多克隆細(xì)胞是轉(zhuǎn)染目的基因后直接經(jīng)抗藥基因篩選得到的。是多種陽性細(xì)胞克隆的混合。在長期的培養(yǎng)過程中產(chǎn)量由可能會發(fā)生變化。