細胞復蘇，生物學的種術(shù)語，是指將凍存在液氮或者-70℃冰箱中的細胞解凍之后重新培養(yǎng)，細胞恢復生長的過程。細胞凍存是細胞保存的主要方法之。利用凍存技術(shù)將細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。
細胞凍存的原理
細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以大限度的保存細胞活力。目細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外，減少細胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細胞造成損傷。
細胞復蘇的步驟
①將冷凍管從液氮中取出，迅速投入37℃水浴融化，細胞融化后要盡快(約1min)移出37℃水浴。37℃水浴時間延長會提高細胞死亡率，復蘇過程中般細胞死亡率在20%～25%之間。
②迅速用酒精棉球擦拭冷凍管外部殺菌消毒，然后放置在冰浴上。
③小心開啟瓶蓋，把細胞轉(zhuǎn)入含有4mL培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，然后把培養(yǎng)瓶移至培養(yǎng)箱，26℃～28℃培養(yǎng)1h，讓細胞貼壁。
④細胞貼壁后，小心移棄培養(yǎng)基，主要是去掉DMSO(懸浮生長細胞要通過離心沉淀除去DMSO)、死細胞及其碎片，加5mL新鮮培養(yǎng)基，26℃～28℃培養(yǎng)。
⑤細胞培養(yǎng)24h后，更換新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)直到形成單層，便可以傳代。
⑥詳細記錄復蘇細胞的名稱、數(shù)量、復蘇時間、存放部位等。
細胞復蘇的注意事項
1、注意無菌操作。
2、應在1-2min內(nèi)使凍存液完全融化。如果復溫速度太慢，則會造成細胞損傷。另外，細胞復蘇后的操作好在4℃冰浴中進行，以減少冷凍保護劑對細胞的毒性。
3、細胞復蘇過程中，升溫的速率要大，把從液氮或-70℃冰箱中取出的細胞在短的時間內(nèi)放入水浴鍋。
4、細胞放入水浴中注意用鑷子夾住細胞凍存管并在水浴中不時晃動，使其受熱均勻，并防止水浴時水進入細胞凍存管污染細胞。打開細胞凍存管之要用酒精棉球?qū)龃婀芟静⒘栏伞?br />
5、液氮操作有定的危險性，打開液氮罐取出細胞時，戴上防護眼鏡。
6、如果凍存管密封不嚴，液氮可被吸入。由于解凍時凍存管中的氣溫急劇上升，將可能發(fā)生爆炸。復蘇過程中應蓋上恒溫水浴鍋的蓋。
客服一
