也許你很難想象一片葉子、一塊肌肉、一管血液都經(jīng)歷了什么，*后以核酸的形式呈現(xiàn)。核酸的提取是所有分子生物學研究的基礎，核酸提取的質(zhì)量、濃度的多少對于下游分子生物學實驗的成敗起著關鍵的作用，今天我們就說一說關于DNA提取的那些事兒。
一. DNA提取原則
1、保證DNA分子的完整性
2、排除有機溶劑與金屬離子的干擾
3、排除
蛋白質(zhì)、多糖、多酚、脂類的污染
4、獲得高純度的核酸
5、方法操作簡便，穩(wěn)定性強
二. DNA有哪些
染色體DNA、線粒體DNA、葉綠體DNA、
質(zhì)粒DNA、病毒/噬菌體DNA等。
三. 樣本的收集保存
注：詳細操作可參見《派森諾樣品制備及質(zhì)量要求》文件，可向當?shù)劁N售或技術支持索取。
四. DNA提取原理及方法
目前提取DNA的方法繁多，如CTAB法、SDS法、各種
試劑盒等，但原理大致相同，主要是裂解和純化兩大步驟。首先對樣品破壁裂解，采用機械力、
化學試劑、酶等方法將DNA釋放出來，隨后去除蛋白質(zhì)、糖、酚、金屬離子等雜質(zhì)，再用無水乙醇、異丙醇沉淀或載體吸附DNA，之后洗滌溶解即可得到核酸。
雖然原理相似，但不同提取方法使用的試劑有很大差別，下面列舉出在提取過程中，常用試劑的作用及原理：
1、裂解相關試劑
（1）CTAB（十六烷基三甲基溴化銨）:一種陽離子表面活性劑，在高鹽
溶液中，CTAB可與蛋白質(zhì)和中性多糖形成復合物而沉淀，但不能沉淀核酸和酸性多糖，另外它還能保護DNA不受內(nèi)源核酸酶的降解。
（2）SDS（十二烷基硫酸鈉）:一種陰離子去污劑，可使
細胞膜崩解，與膜蛋白疏水部分結合并使其與膜分離，使蛋白變性。
（3）PVP(聚乙烯吡咯烷酮):是酚類化合物的螯合劑，可與多酚化合物形成復合體，使其不被氧化成醌類。
（4）β-巰基乙醇：抗氧化劑，有效地防止酚氧化成醌，避免褐變，使酚容易去除。
（5）蛋白酶K：用于生物樣品中蛋白質(zhì)的一般降解，將蛋白質(zhì)降解成小分子肽或氨基酸，使DNA分子分離出來。
2.純化相關試劑耗材
（1）苯酚：使蛋白質(zhì)變性，同時抑制了DNase的降解作用。
（2）氯仿：克服酚的缺點，加速有機相與液相分層，去除核酸溶液中的跡量酚（酚易溶于氯仿中）。
（3）異戊醇：少許異戊醇可以減少蛋白質(zhì)變性操作過程中產(chǎn)生的氣泡，有助于分相，保持體系的穩(wěn)定。
（4）無水乙醇：沉淀DNA，不易沉淀鹽類等物質(zhì)；異丙醇也可沉淀DNA，體積小時間短，但易沉淀鹽類物質(zhì)。
（5）核酸純化柱：采用硅膠膜作為核酸的特異性吸附材料（高鹽低pH值結合核酸），同時去除其他雜質(zhì)，可以程度地回收樣品中的DNA（低鹽高pH值洗脫），可以用于各物種的DNA提取。操作簡單、用時短、純度高。
（6）DNA提取磁珠：是一種核心為四氧化三鐵、表面修飾大量硅羥基的磁性微球，能在高鹽、低pH條件下和溶液中的核酸通過疏水作用、氫鍵作用和靜電作用等發(fā)生特異性結合，而不與其它雜質(zhì)（如蛋白）結合，可迅速從生物樣品中分離核酸，操作安全簡單，非常有利于核酸的自動化和高通量提取。
五. 核酸的保存
短時間（24h內(nèi)）可放置4℃保存，長期（24h以上）放置于-20℃進行保存，期間避免反復凍融。對于純度不高、總量較少、完整度不好的非高質(zhì)量核酸，還需盡早進行后續(xù)實驗，以防保存時間過長，DNA質(zhì)量更受影響，進而影響建庫和測序質(zhì)量。
以上為大家列舉了在提取過程中經(jīng)常用到的試劑及原理，給出了核酸保存的建議。要強調(diào)的是相同的原理下，不是試劑的去污、裂解效果越好就用的越多，還是要在實際提取過程中，根據(jù)提取材料的不同、提取結果的差異，靈活調(diào)整實驗方案。
客服一
