生物大分子制成品的正確保存極為重要，一旦保存不當(dāng)，辛辛苦苦制成的樣品失活、變性、變質(zhì)，使前面的全部制備工作化為烏有，損失慘重，全功盡棄。
影響生物大分子樣品保存的主要因素有：
⑴空氣：空氣的影響主要是潮解、微生物污染和自動(dòng)氧化�？諝庵形⑸锏奈廴究墒箻悠犯瘮∽冑|(zhì)，樣品吸濕后會(huì)引起潮解變性，同時(shí)也為微生物污染提供了有利的條件。某些樣品與空氣中的氧接觸會(huì)自發(fā)引起游離基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，還原性強(qiáng)的樣品易氧化變質(zhì)和失活，如維生素C、巰基酶等。
⑵溫度：每種生物大分子都有其穩(wěn)定的溫度范圍，溫度升高10℃，氧化反應(yīng)約加快數(shù)倍，酶促反應(yīng)增加1～3倍。因此通常絕大多數(shù)樣品都是低溫保存，以抑制氧化、水解等化學(xué)反應(yīng)和微生物的生成。
⑶水份：包括樣品本身所帶的水份和由空氣中吸收的水份。水可以參加水解、酶解、水合和加合。加速氧化、聚合、離解和霉變。
⑷光線：某些生物大分子可以吸收一定波長(zhǎng)的光，使分子活化不利于樣品保存，尤其日光中的紫外線能量大，對(duì)生物大分子制品影響，樣品受光催化的反應(yīng)有變色、氧化和分解等，通稱(chēng)光化作用。因此樣品通常都要避光保存。
⑸樣品的pH：保存液態(tài)樣品時(shí)注意其穩(wěn)定的pH范圍，通�？蓮奈墨I(xiàn)和手冊(cè)中查得或做實(shí)驗(yàn)求得，因此正確選擇保存液態(tài)樣品的緩沖劑的種類(lèi)和濃度就十分重要。
⑹時(shí)間：生化和分子生物學(xué)樣品不可能永久存活，不同的樣品有其不同的有效期，因此，保存的樣品必須寫(xiě)明日期，定期檢查和處理。
現(xiàn)以保存
蛋白質(zhì)和酶為例：
⑴低溫下保存：由于多數(shù)蛋白質(zhì)和酶對(duì)熱敏感，通常35℃～40℃以上就會(huì)失活，冷藏于冰箱一般只能保存一周左右，而且蛋白質(zhì)和酶越純?cè)讲环�(wěn)定，
溶液狀態(tài)比固態(tài)更不穩(wěn)定。因此通常要保存于－5℃～－20℃，如能在－70℃下保存則*為理想。極少數(shù)酶可以耐熱：如核糖核酸酶可以短時(shí)煮沸；胰蛋白酶在稀HCl中可以耐受90℃；蔗糖酶在50℃～60℃可以保持15 min～30 min不失活。還有少數(shù)酶對(duì)低溫敏感，如鳥(niǎo)肝丙酮酸羧化酶25℃穩(wěn)定，低溫下失活，過(guò)氧化氫酶要在0℃～4℃保存，冰凍則失活，羧肽酶反復(fù)凍融會(huì)失活等。
⑵制成干粉或結(jié)晶保存：蛋白質(zhì)和酶固態(tài)比在溶液中要穩(wěn)定的多。固態(tài)干粉制劑放在干燥劑中可長(zhǎng)期保存，例如葡萄糖氧化酶干粉0℃下可保存2年，－15℃下可保存8年。通常，酶與蛋白質(zhì)含水量大于10％，室溫低溫下均易失活，含水量小于5％時(shí)，37℃活性會(huì)下降，如要抑制微生物活性，含水量要小于10％，抑制化學(xué)活性，含水量要小于3％。此外要特別注意酶在凍干時(shí)往往會(huì)部分失活。
⑶在保護(hù)劑下保存：很早就有人觀察到，在無(wú)菌條件下，室溫保存了45年的血液，血紅蛋白僅有少量改變，許多酶仍保留部分活性，這是因?yàn)檠褐杏械鞍踪|(zhì)穩(wěn)定的因素，為了長(zhǎng)期保存蛋白質(zhì)和酶，常常要加入某些穩(wěn)定劑：例如：①惰性的生化或有機(jī)物質(zhì)：如糖類(lèi)、脂肪酸、
牛血清白蛋白、氨基酸、多元醇等，以保持穩(wěn)定的疏水環(huán)境。②中性鹽：有一些蛋白質(zhì)要求在高離子強(qiáng)度（1 mol/L～4mol/L或飽和的鹽溶液）的極性環(huán)境中才能保持活性。*常用的是：MgSO4、NaCl、(NH4)SO4等。使用時(shí)要脫鹽。③巰基試劑：一些蛋白質(zhì)和酶的表面或內(nèi)部含有半胱氨酸巰基，易被空氣中的氧緩饅氧化為磺酸或二硫化物而變性，保存時(shí)可加入半胱氨酸或巰基乙醇。
總之，對(duì)樣品的保存必須給以只夠的重視，一些常用酶的保存條件可參見(jiàn)《生物化學(xué)制備技術(shù)》（蘇拔賢主編）一書(shū)中的"一些酶保存的條件和穩(wěn)定性"表，其他各種生物大分子和生物制劑的保存條件，可查閱有關(guān)的文獻(xiàn)和酶學(xué)手冊(cè)。
6. 分離純化方法的選擇
生物大分子能否高效率地制備成功，關(guān)鍵在于分離純化方案的正確選擇和各個(gè)分離純化方法實(shí)驗(yàn)條件的探索。選擇與探索的依據(jù)就是生物大分子與雜質(zhì)之間的生物學(xué)和物理化學(xué)性質(zhì)上的差異。由本章前述的生物大分子制備的各種特點(diǎn)可以看出，分離純化方案必然是千變?nèi)f化的。
制備生物大分子的方法可以粗略地分類(lèi)如下：① 以分子大小和形態(tài)的差異為依據(jù)的方法：差速離心、區(qū)帶離心、超濾、透析和凝膠過(guò)濾等。② 以溶解度的差異為依據(jù)的方法：鹽析、萃取、分配層析、選擇性沉淀和結(jié)晶等。③ 以電荷差異為依據(jù)的方法：電泳、電滲析、等電點(diǎn)沉淀、吸附層析和離子交換層析等。④ 以生物學(xué)功能專(zhuān)一性為依據(jù)的方法：親和層析等。
客服一
