1、讓凝膠電泳變得更快,更漂亮
方法改進:將電泳電壓進行定時變化,例如可以在開始時將電泳電壓調(diào)節(jié)至 100V,大約 15min。
使條帶的確可以因為自身片段大小不同而產(chǎn)生較大差別的泳動速度,從而將片段分離,然而現(xiàn)在的分離或許會間距較小,從而圖片很不漂亮,或者不易觀察.可以緊接著進行 120V-130V 的電壓進行較小差 異電泳,但是由于電泳電壓較大,可以避免過大的片段殘存在膠孔不易泳動的情況.
結(jié)果:這樣兩個電壓進行配合電泳,便可以得到非常漂亮的電泳條帶,并且可以節(jié)省 1/5-2/5 左右 的時間.
2、RNA 電泳如何得出漂亮的條帶
方法改進:1.電泳槽,制膠器,梳子等的清洗:去污劑浸泡過夜——>自來水沖洗干凈——>ddH20 沖洗——>3%H2O2 灌滿浸泡過夜——>滅活的 0.1%DEPC水沖洗干凈——>超凈臺內(nèi)紫外線照射過夜. 2.燒瓶,燒杯,藥匙,量筒等制膠器械的清洗:0.1%DEPC 水浸泡過夜后高壓消毒滅活,烘箱烘干.
或 者 ddH20 清洗干凈, 超凈臺內(nèi)紫外線照射過夜. 3.電泳緩沖液必須是 RNase free. 4.預(yù)電泳 5-10min 減少了非特異 RNA 條帶的出現(xiàn),有利于分離和純化,同時可根據(jù)電泳儀是否冒泡判斷電 泳儀裝置是否有誤.
5.樣品是在電泳緩沖液液略低于膠表面而不是在高過膠面時加進齒槽,避免了加樣 時 RNA 的擴散,加樣后 RNA 從齒槽逸出造成 RNA 的彌散及定位不良等現(xiàn)象. 6.電泳 3-5min 讓 RNA 進入凝膠后再加電泳緩沖液液高過表面,確保了加到每個槽中的 RNA 量及定位的準(zhǔn)確性,從而有利于 DNA 的鑒定和純化.
3、如何提高 SDS-PAGE 的分辨率
方法改進:借鑒 Tricine-SDS-PAGE 中添加甘油或者尿素來提高分辨率的成功經(jīng)驗,在普通的 SDS-PAGE 中加入約 13%的甘油,同樣可以提高分辨率,有效防止小分子量
蛋白的彌散.只要把原來 配方中的水換成 60%的甘油,就可以了.
結(jié)果:加入甘油之后,條帶較細,分得更開.
4、改進一點點,我們能得到更加美觀的 SDS-PAGE 膠
方法改進:所做的改進很簡單卻很有效,加完分離膠后,用移液槍吸取酒精(濃度沒有特別要求, 干凈無污染就好)加到分離膠上至覆蓋界面,靜置片刻后放到 37℃恒溫箱中可加速膠的凝固.待到分 離膠完全凝固之后倒去上層的酒精,就可以看到齊平漂亮的界面啦!
改進二:脫色 背景:給染色結(jié)束的 SDS-PAGE 膠脫色往往需要比較長的時間,否則會由于脫色不完全而導(dǎo)致條 帶不清晰,影響到拍照的效果.
方法改進:改進的方法很簡單易行——取一張我們常常隨身攜帶的面巾紙,打個結(jié)放入盛有脫色液 的大培養(yǎng)皿里放到脫色搖床上,這樣一來,原來過夜脫色達到的效果現(xiàn)在只需要短短的 3,4 個小時就 可以輕松實現(xiàn)了. PS:希望大家這個時候用的面巾紙是質(zhì)量比較好不容易掉屑的...
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