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遠(yuǎn)慕分享：傷口愈合/細(xì)胞劃痕實驗新方法分享
閱讀次數(shù)：831 發(fā)布時間：2019/12/12 10:03:14
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細(xì)胞劃痕實驗是一種操作簡單，經(jīng)濟實惠的研究細(xì)胞遷移的體外試驗方法。

這種方法的原理是，當(dāng)細(xì)胞長到融合成單層狀態(tài)時，在融合的單層細(xì)胞上人為制造一個空白區(qū)域，稱為“劃痕”。劃痕邊緣的細(xì)胞會逐漸進(jìn)入空白區(qū)域使“劃痕”愈合。

基本的步驟包括“劃痕”的制造，細(xì)胞遷移期間圖像的獲得以及后期數(shù)據(jù)的處理。
 
優(yōu)點：
1，在一定程度上模擬了體內(nèi)細(xì)胞遷移的過程。
2, 非常適合研究細(xì)胞與胞外基質(zhì)（ECM），細(xì)胞與細(xì)胞之間相互作用引起的細(xì)胞 遷移。
3，與包括活細(xì)胞成像在內(nèi)的顯微鏡系統(tǒng)兼容，可用于分析細(xì)胞間的相互作用。

4，研究細(xì)胞遷移的體外實驗中*簡單的方法。

傳統(tǒng)實驗方法

實驗步驟：
1，培養(yǎng)板接種細(xì)胞之前先用marker筆在12孔板背面畫橫線標(biāo)記（方便拍照時定位同一 個視野）。
2，細(xì)胞消化后接入12孔板，數(shù)量以貼壁后鋪滿板底為宜（數(shù)量少時可培養(yǎng)一段時間至鋪滿板底）。
3,，細(xì)胞鋪滿板底后，用1ml槍頭垂直于孔板制造細(xì)胞劃痕，盡量保證各個劃痕寬度一致。（人工槍頭制造劃痕難以保證劃痕寬度的一致性，影響實驗結(jié)果，這也是該方法的缺陷。）
4，吸去細(xì)胞培養(yǎng)液，用PBS沖洗孔板三次，洗去劃痕產(chǎn)生的細(xì)胞碎片。
5，加入無血清培養(yǎng)基，拍照記錄。
6，將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)，每隔4-6小時取出拍照。

7，根據(jù)收集圖片數(shù)據(jù)分析實驗結(jié)果。

Culture Insert方法
1，準(zhǔn)備細(xì)胞，培養(yǎng)液，culture Insert。
2，將細(xì)胞接種于Dish中間的Insert，細(xì)胞長滿Insert 區(qū)域后用鑷子移除Insert即可產(chǎn)生500μm寬度的劃痕。
3，每隔4-6小時拍照記錄。

4，根據(jù)收集圖片數(shù)據(jù)分析實驗結(jié)果。

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