抗體毀了你的western blot實(shí)驗(yàn)？親，你并不是孤單的一個(gè)人。有時(shí)，你會(huì)發(fā)現(xiàn)新一批次的抗體無(wú)法再現(xiàn)之前的結(jié)果。有時(shí)，你甚至發(fā)現(xiàn)抗體根本不能與目標(biāo)
蛋白結(jié)合。錢(qián)花了不說(shuō)，時(shí)間也一去不復(fù)返。如何選擇適當(dāng)?shù)腤B抗體，讓Bio-Rad的專(zhuān)家來(lái)教你幾招。
1. 根據(jù)應(yīng)用來(lái)購(gòu)買(mǎi)
抗體是一個(gè)通用的工具，但它們本身也有局限性。有些抗體無(wú)法結(jié)合變性的蛋白，這就讓它在western blot中表現(xiàn)很糟。你要購(gòu)買(mǎi)的產(chǎn)品是經(jīng)過(guò)western blotting的驗(yàn)證，有數(shù)據(jù)做支持。如果只有幾篇文獻(xiàn)，那要小心，因?yàn)樗ǔＶ伙@示了目的條帶，而不清楚是否有非特異的條帶。
2. 查看所有的數(shù)據(jù)
供應(yīng)商的網(wǎng)站通常列出了抗體的應(yīng)用以及引用的文獻(xiàn)，你應(yīng)該一篇一篇地去看。如果在選購(gòu)時(shí)參考的數(shù)據(jù)不多，那么實(shí)驗(yàn)可能會(huì)有風(fēng)險(xiǎn)。
3. 并非所有驗(yàn)證都相同
一些供應(yīng)商會(huì)明明白白地告訴你它們?nèi)绾悟?yàn)證抗體。為了節(jié)約時(shí)間和成本，許多公司并沒(méi)有驗(yàn)證每一批的抗體，因此批次之間可能存在相當(dāng)大的差異。有些公司在驗(yàn)證中使用過(guò)表達(dá)的蛋白來(lái)證明抗體能夠與目的蛋白結(jié)合。由此產(chǎn)生的數(shù)據(jù)并不能很好地說(shuō)明抗體在western blot中表現(xiàn)如何�？贵w若是經(jīng)過(guò)全
細(xì)胞裂解液以及各種樣品的檢驗(yàn)，每一批都是如此，那么就值得購(gòu)買(mǎi)。
4. 使用第三方資源
一些機(jī)構(gòu)，如CiteAb，提供了抗體引用的數(shù)據(jù)庫(kù)。而另一些自己開(kāi)展檢測(cè)，并公開(kāi)他們的數(shù)據(jù)。不過(guò)，盡管他們綜合了大量的數(shù)據(jù)，但這往往來(lái)自單一來(lái)源，通常是二手的。因此，你需要檢查這些信息是否與供應(yīng)商網(wǎng)站上的一手?jǐn)?shù)據(jù)一致。
5. 看看有沒(méi)有試用裝
許多公司現(xiàn)在提供小包裝的抗體，讓你大膽嘗試，再?zèng)Q定是否購(gòu)買(mǎi)大包裝。這可是個(gè)好機(jī)會(huì)，既能驗(yàn)證抗體是否適合你的實(shí)驗(yàn)，又不用擔(dān)心浪費(fèi)太多錢(qián)。
6. 做好優(yōu)化的準(zhǔn)備
供應(yīng)商的驗(yàn)證并不能完全取代內(nèi)部的檢驗(yàn)。你的樣品不同，操作步驟也不完全相同。而這些因素都會(huì)影響抗體的表現(xiàn)，因此需要將你的western blot與抗體的驗(yàn)證分開(kāi)而論。你的研究，*終還是需要你來(lái)把關(guān)。
7. *終原則
無(wú)論你是采購(gòu)還是使用抗體，你都必須記住抗體技術(shù)存在缺陷，它們可能會(huì)有變化。在選擇抗體時(shí)需要嚴(yán)謹(jǐn)。盡可能使用陽(yáng)性和陰性對(duì)照，控制你自己的偏見(jiàn)，確保你的western blot能提供正確的答案。
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