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伊文思藍(lán)染色液（0.5%）

產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 

    伊文思藍(lán)（Evans Blue）又稱偶氮藍(lán)，分子式 C34H24N6Na4O14S4，分子量為 960.80，CAS 號(hào)為 314-13-6。伊文思藍(lán)屬于一種常用的偶氮染料制劑，因其分子量大小與血漿白蛋白相近， 而且在血液中與血漿白蛋白有很高的親和力， 因此在神經(jīng)科學(xué)研究中常被用于示蹤觀察血腦屏障（BBB）的完整性，也用于細(xì)胞染色區(qū)分活細(xì)胞、死細(xì)胞，亦可測(cè)定血容量。伊文思藍(lán)作臨床藥物用于測(cè)定血漿和血容量， 也可作動(dòng)脈插管的定位。 正常情況下血漿白蛋白無(wú)法透過(guò)血腦屏障， 所以染色后如果神經(jīng)系統(tǒng)血腦屏障完整， 與血漿白蛋白結(jié)合的依文思藍(lán)無(wú)法使其著色。相反， 如果神經(jīng)系統(tǒng)血腦屏障被破壞， 依文思藍(lán)就可以進(jìn)入神經(jīng)系統(tǒng)并使其著色。在熒光波長(zhǎng) 470nm、540nm 處有強(qiáng)峰， 680 nm 處有 弱峰�？梢允褂没瘜W(xué)透析法和比色法進(jìn)行檢測(cè)。 

    伊文思藍(lán)與臺(tái)盼藍(lán)都是細(xì)胞活性染料， 常用于檢測(cè)細(xì)胞膜的完整性和細(xì)胞是否存活。 活

細(xì)胞不會(huì)被染成藍(lán)色，而死細(xì)胞會(huì)被染成淡藍(lán)色。 伊文思藍(lán)染色后，通過(guò)顯微鏡下直接計(jì)數(shù)

或顯微鏡下拍照后計(jì)數(shù)，就可以對(duì)細(xì)胞存活率進(jìn)行比較精確的定量，其中 0.5%為*常用的

濃度。 活細(xì)胞因有外排功能而無(wú)法被伊文思藍(lán)染色， 因此可以通過(guò)此方法在顯微鏡下區(qū)分死

細(xì)胞與活細(xì)胞，但無(wú)法區(qū)分死亡與壞死。 

產(chǎn)品組成： 

自備材料： 

1、 注射器、組織勻漿器 

2、 PBS 

3、 三或丙酮 

操作步驟（僅供參考）： 

（一）血腦屏障通透性 

1、 取處理后的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（以小鼠為例）， 靜脈注射 Evans Blue Stain （0.5%）數(shù)秒至 1 分鐘內(nèi)，

    小鼠眼睛、皮膚出現(xiàn)藍(lán)色。0.5～1h 后處死小鼠，取目的腦組織。 

2、 腦組織置于 1.5ml 離心管中，加入 1ml PBS， 迅速 用組織勻漿器將腦組織制成勻漿, 

    1000g 離心 15min。 

3、 取上清，加入等量三，4℃孵育 18～24h。該步驟亦可采用如下操作: 取上清，

    按上清:丙酮=3:7 比例加入丙酮，室溫孵育 24h。 

4、 1000g 離心 20～30 min 或 2000g 離心 15min。 

5、 取上述溶液 1～2ml，用分光光度計(jì)測(cè)620 nm 處吸光值 （OD 值）。同時(shí)測(cè)定已知不同梯度     的標(biāo)準(zhǔn)依文思藍(lán)的 OD 值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出待測(cè)待測(cè)樣品的依文思 

    藍(lán)含量。  
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（二）活細(xì)胞染色 

1、取 100ml 重懸細(xì)胞到常規(guī) 1.5ml 或 0.5ml 離心管內(nèi)，入 100ml Evans Blue Stain 輕輕

   混勻，染色 3min（染色時(shí)間可適當(dāng)延長(zhǎng)，但不宜超過(guò) 10min）。 

2、吸取少量經(jīng)過(guò)染色后的細(xì)胞，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。通常如果要比較精確地進(jìn)行定量，

   每個(gè)細(xì)胞樣品至少數(shù) 500 個(gè)細(xì)胞，數(shù)出藍(lán)色細(xì)胞和細(xì)胞總數(shù)。細(xì)胞存活率計(jì)算公式如下: 

   細(xì)胞存活率＝（細(xì)胞總數(shù)－藍(lán)色細(xì)胞數(shù)）/細(xì)胞總數(shù)´100% 

注意事項(xiàng)： 

1、 Evans Blue Stain 對(duì)人體有輕微毒性，請(qǐng)小心防護(hù)。 

2、 細(xì)胞染色時(shí)，注意凋亡小體偶爾也有拒染現(xiàn)象。 

3、 血腦屏障通透性實(shí)驗(yàn)中， Evans Blue Stain注射量應(yīng)根據(jù)不同動(dòng)物以及動(dòng)物的重量調(diào)整。 

4、 采用低溫冷凍離心機(jī)進(jìn)行離心。 

5、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。 

有效期： 6 月有效。