技術(shù)文獻(xiàn)
人、鼠細(xì)胞融合實驗分三步進(jìn)行∶
先用熒光染料標(biāo)記抗體∶
將小鼠的抗體與發(fā)綠色熒光的熒光素（fluorescin）結(jié)合，人的抗體與發(fā)紅色熒光的羅丹明（rhodamine）結(jié)合；
第二步是將小鼠細(xì)胞和人細(xì)胞在滅活的仙臺病毒的誘導(dǎo)下進(jìn)行融合；
后一步將標(biāo)記的抗體加入到融合的人、鼠細(xì)胞中，讓這些標(biāo)記抗體同融合細(xì)胞膜上相應(yīng)的抗原結(jié)合。
開始，融合的細(xì)胞一半是紅色，一半是綠色。在37℃下40分鐘后，兩種顏色的熒光在融合的雜種細(xì)胞表面呈均勻分布，這說明抗原蛋白在膜平面內(nèi)經(jīng)擴(kuò)散運動而重新分布。這種過程不需要ATP。如果將對照實驗的融合細(xì)胞置于低溫（1℃）下培育，則抗原蛋白基本停止運動。這一實驗結(jié)果令人信服地證明了膜整合蛋白的側(cè)向擴(kuò)散運動。
細(xì)胞融合關(guān)鍵
1．技術(shù)上的誤差常常導(dǎo)致融合的失敗。例如，供者淋巴細(xì)胞沒有查到免疫應(yīng)答。這必然要失敗的。
2．融合試驗大的失敗原因是污染，融合成功的關(guān)鍵是提供一個無毒無菌的操作環(huán)境。
人、鼠細(xì)胞融合實驗分三步進(jìn)行∶
先用熒光染料標(biāo)記抗體∶
將小鼠的抗體與發(fā)綠色熒光的熒光素（fluorescin）結(jié)合，人的抗體與發(fā)紅色熒光的羅丹明（rhodamine）結(jié)合；
第二步是將小鼠細(xì)胞和人細(xì)胞在滅活的仙臺病毒的誘導(dǎo)下進(jìn)行融合；
后一步將標(biāo)記的抗體加入到融合的人、鼠細(xì)胞中，讓這些標(biāo)記抗體同融合細(xì)胞膜上相應(yīng)的抗原結(jié)合。
開始，融合的細(xì)胞一半是紅色，一半是綠色。在37℃下40分鐘后，兩種顏色的熒光在融合的雜種細(xì)胞表面呈均勻分布，這說明抗原蛋白在膜平面內(nèi)經(jīng)擴(kuò)散運動而重新分布。這種過程不需要ATP。如果將對照實驗的融合細(xì)胞置于低溫（1℃）下培育，則抗原蛋白基本停止運動。這一實驗結(jié)果令人信服地證明了膜整合蛋白的側(cè)向擴(kuò)散運動。
細(xì)胞融合關(guān)鍵
1．技術(shù)上的誤差常常導(dǎo)致融合的失敗。例如，供者淋巴細(xì)胞沒有查到免疫應(yīng)答。這必然要失敗的。
2．融合試驗大的失敗原因是污染，融合成功的關(guān)鍵是提供一個無毒無菌的操作環(huán)境。
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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