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技術(shù)文獻

液體培養(yǎng)基中細菌培養(yǎng)實驗步驟
閱讀次數(shù)：65 發(fā)布時間：2025/2/19 9:33:07
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 儀器、耗材玻璃瓶燒瓶
 
實驗步驟
 
一、過夜培養(yǎng)
 
1.將5 ml預(yù)熱的液體培養(yǎng)基移入一無菌的16 mm或18 mm管中。
 
2.用接種環(huán)挑一個單菌落，浸沒于培養(yǎng)液中并輕輕振動接種環(huán)，使待接種的細菌分散在培養(yǎng)液中。
 
3.蓋好試管，在搖床或轉(zhuǎn)鼓式培養(yǎng)裝置上以60 r/min速度，于37°C培養(yǎng)至飽和（1X109~2X109細胞/ml，>6 h）。
 
二、大體積培養(yǎng)
 
1.在一無菌的Erlenmeyer或baffle瓶中，用新鮮預(yù)熱的培養(yǎng)液按I1:100的比例稀釋過夜培養(yǎng)物，燒瓶的體積應(yīng)該是培養(yǎng)液體積的5倍以上。
 
如果不搖動培養(yǎng)，所用燒瓶的體積應(yīng)比培養(yǎng)液體積大20倍以上，以確保足夠的通氣。
 
2.37°C，劇烈搖動培養(yǎng)（約300 r/min)。
 
三、利用計數(shù)板監(jiān)測生長情況
 
1.用一片干凈的蓋玻片蓋住一片干凈的計數(shù)玻片（或者血球計)。
 
2.小心地將一小滴培養(yǎng)液滴到蓋玻片的邊緣，這樣培養(yǎng)液可擴散人蓋玻片下。
 
3.在相差顯微鏡400倍下觀察，并且按一個小方塊中所見的每個細菌大約相當于2X107細胞/ml計算細菌濃度。
 
四、利用分光光度計監(jiān)測生長情況
 
因為儀器的差異性，分光光度計應(yīng)該用一已知濃度的培養(yǎng)液進行校準。
 
1.測OD600。為了獲得一個準確的讀數(shù)，稀釋培養(yǎng)液至OD600＜1。
 
2.按每0.1 OD值大約相當于108細胞/ml計算細菌濃度。

原創(chuàng)作者：上海遠慕生物科技有限公司

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