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1. 冷凍細(xì)胞之活化原則為快速解凍，以避免冰晶重新結(jié)晶而對(duì)細(xì)胞造成傷害，導(dǎo)致細(xì)胞之死亡。

2. 細(xì)胞活化后，約需數(shù)日，或繼代至二代，其細(xì)胞生長(zhǎng)或特性表現(xiàn)才會(huì)恢復(fù)正常 ( 例如產(chǎn)生單株抗體或是其它蛋白質(zhì) ) 。

3. 材料

3.1 37 oC 恒溫水槽

3.2 新鮮培養(yǎng)基

3.3 無(wú)菌吸管 / 離心管 / 培養(yǎng)瓶

3.4 液氮或干冰容器

4. 步驟：

4.1 操作人員應(yīng)戴防護(hù)面罩及手套，防止冷凍管可能爆裂之傷害。

4.2 自液氮或干冰容器中取出冷凍管，檢查蓋子是否旋緊，由于熱脹冷縮過(guò)程，此時(shí)蓋子易松掉。

4.3 將新鮮培養(yǎng)基置于 37 °C 水槽中回溫，回溫后噴以 70 % 酒精并擦拭之，移入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。

4.4 取出冷凍管，立即放入 37 °C 水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在 1 分鐘內(nèi)全部融化，以 70 % ethanol 擦拭保存管外部，移入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。

4.5 取出 0.9 ml 解凍之細(xì)胞懸浮液，緩緩加入有培養(yǎng)基之培養(yǎng)容器內(nèi) ( 稀釋比例為 1:10 ～ 1:15) ，混合均勻，放入 CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。另取 0.1 ml 解凍細(xì)胞懸浮液作存活測(cè)試。

4.6 解凍后是否立即去除冷凍保護(hù)劑 ( 例如 DMSO 或 glycerol) ，依細(xì)胞種類而異，般而言，大都不需要立即去除冷凍保護(hù)劑。惟若要立即去除，則將解凍之細(xì)胞懸浮液加入含有 5-10 ml 培養(yǎng)基之離心管內(nèi)，離心 1,000 rpm, 5 分鐘，移去上清液，加入新鮮培養(yǎng)基，混合均勻，放入 CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

4.7 若不需立即去除冷凍保存劑，則在解凍培養(yǎng)后隔日更換培養(yǎng)基。

原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司