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技術(shù)文獻

Western Blot為何標記二抗而不是一抗?
閱讀次數(shù):1339 發(fā)布時間:2020/5/14 10:23:20
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    如果一抗上直接加標記,不但不能保證抗體抗原反映的特異性,也不能保證實驗的可重復(fù)性。

    首先,由于抗體都是人工去設(shè)計的,對于一個人工設(shè)計的蛋白質(zhì)來說,你可以設(shè)計一個很好的抗體與他結(jié)合;然而對于天然蛋白質(zhì),你不能保證一個很高的識別率和準確度。所以,針對1抗,我們可以設(shè)計出完美的2抗,然而針對原蛋白質(zhì),你無法設(shè)計一個特別完美的1抗。所以,直接標記1抗的出來的結(jié)果是不準確的,而標記2抗是相對于1抗直接標記來說更準確的,所以經(jīng)過大量的實驗之后人們拋棄了直接標1抗的方法。當然,標2抗也不是完全完美的,當然你也可以標3抗,4抗,不過那個成本就指數(shù)上升了,在保證一定的置信度的情況下,人們一般標到2抗就夠了。

    其次,對于同一個抗原,不同來源的1抗所識別的位置可能會有很大差異。這樣,你就無法保證試驗的可重復(fù)性。而1抗作為抗原來講,可以將它的抗原決定簇設(shè)計的一樣,這樣針對不同的1抗,2抗是可以保證差不多一個樣子的。而且這也給節(jié)約成本和方便標記帶來了方便。

    所以一般現(xiàn)在都是2步標記,個原因是主要的,第二個原因是次要的。


生物試劑的使用常識:
(1)試劑切忌與手接觸(有些試劑有強腐蝕性、等特性)。
(2)要用潔凈的藥勺,量筒或滴管取用試劑,絕對不允許用同一種工具同時連續(xù)取用多種試劑。取完一種試劑后,應(yīng)將工具洗凈(藥勺要擦干)后,才可取用另一種試劑。
(3)試劑取用后一定要將瓶塞蓋緊,不可放錯瓶蓋和滴管,絕不允許張冠李戴,用完后請及時將瓶放回原處,以免遺忘,帶來不便。
(4)已取出的試劑不能再放回原試劑瓶內(nèi)(怕產(chǎn)生原試劑的再次污染)。



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